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毛细管电泳技术在引物质控方向的应用
来源: | 作者:201321492800086 | 发布时间: 108天前 | 642 次浏览 | 分享到:
毛细管电泳技术可应用于离子、化合物、蛋白、核酸、糖类以及细胞 和病毒等物质的分离和分析,具有高效、快速、成本低、应用模式开放等显著优势。先多用于环境、食品和工业中的离子分析;药物成分分析和核酸蛋白分子产物检测等等。基于毛细管电泳技术研发的仪器很多,在核酸和蛋白检测方面,毛细管电泳技术也正在逐渐替代传统平板凝胶电泳技术。

前言

毛细管电泳技术可应用于离子、化合物、蛋白、核酸、糖类以及细胞 和病毒等物质的分离和分析,具有高效、快速、成本低、应用模式开放等显著优势。先多用于环境、食品和工业中的离子分析;药物成分分析和核酸蛋白分子产物检测等等。基于毛细管电泳技术研发的仪器很多,在核酸和蛋白检测方面,毛细管电泳技术也正在逐渐替代传统平板凝胶电泳技术。

毛细管技术特点


毛细管电泳与传统的平板凝胶电泳相比具有高分辨率、高速度、高自动化的优势。Qsep系列毛细管电泳仪独特,就是基于毛细管电泳技术,巧妙的将电泳胶和染料预先混合,制作成成品检测耗材,结合激光诱导荧光检测器,可快速方便的进行核酸蛋白样本检测。可检测的样本非常广泛,例如:Oligo引物的质量控制、PCR产物检测、总RNA和DNA完整性质控、蛋白质-DNA相互作用测定以及核酸适配体的筛选。


引物方面的应用


就引物质控来说,引物合成公司化学合成引物后通过HPLC仪器回收目的片段后进行冻干,后续还需要进行引物纯度检测。

因为引物的主带和杂带分子量时间可能仅相差1-2和碱基,所以实验室一般采用PAGE方法进行纯度质控,整个质检过程比较繁琐复杂,先配置加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶,取0.2-0.5OD的引物用尿素饱和液溶解后变性95℃ 2min进行600V电压电泳,2-3h后,在紫外灯下检测带型,主带附近无杂带说明纯度高,条带不单一就要根据实际杂带亮度来判断是否需要重新合成。PAGE电泳的整个过程耗时较长,且无法对主带和杂带进行定量分析,更多靠经验判断样本合格与否。

有条件的单位可以采用毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)技术来质检Oligo引物,不过质谱仪价位较高,用于引物质控会提高引物合成的成本,现有单位利用Qsep系列毛细管电泳仪进行Oligo纯度质控,分辨率灵敏度会显著高于PAGE电泳,仪器价位合适,又可同质谱仪一样给出杂带占比,量化的质控数据更具准确性和直观性(见图1,图2所示):


图1 毛细管电泳引物质控结果



图2 毛细管电泳引物质控结果