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毛細管電泳技術在引物質控方向的應用
來源: | 作者:201321492800086 | 發布時間: 206天前 | 835 次瀏覽 | 分享到:
毛細管電泳技術可應用于離子、化合物、蛋白、核酸、糖類以及細胞 和病毒等物質的分離和分析,具有高效、快速、成本低、應用模式開放等顯著優勢。先多用于環境、食品和工業中的離子分析;藥物成分分析和核酸蛋白分子產物檢測等等。基于毛細管電泳技術研發的儀器很多,在核酸和蛋白檢測方面,毛細管電泳技術也正在逐漸替代傳統平板凝膠電泳技術。

前言

毛細管電泳技術可應用于離子、化合物、蛋白、核酸、糖類以及細胞 和病毒等物質的分離和分析,具有高效、快速、成本低、應用模式開放等顯著優勢。先多用于環境、食品和工業中的離子分析;藥物成分分析和核酸蛋白分子產物檢測等等。基于毛細管電泳技術研發的儀器很多,在核酸和蛋白檢測方面,毛細管電泳技術也正在逐漸替代傳統平板凝膠電泳技術。

毛細管技術特點


毛細管電泳與傳統的平板凝膠電泳相比具有高分辨率、高速度、高自動化的優勢。Qsep系列毛細管電泳儀獨特,就是基于毛細管電泳技術,巧妙的將電泳膠和染料預先混合,制作成成品檢測耗材,結合激光誘導熒光檢測器,可快速方便的進行核酸蛋白樣本檢測。可檢測的樣本非常廣泛,例如:Oligo引物的質量控制、PCR產物檢測、總RNA和DNA完整性質控、蛋白質-DNA相互作用測定以及核酸適配體的篩選。


引物方面的應用


就引物質控來說,引物合成公司化學合成引物后通過HPLC儀器回收目的片段后進行凍干,后續還需要進行引物純度檢測。

因為引物的主帶和雜帶分子量時間可能僅相差1-2和堿基,所以實驗室一般采用PAGE方法進行純度質控,整個質檢過程比較繁瑣復雜,先配置加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝膠,取0.2-0.5OD的引物用尿素飽和液溶解后變性95℃ 2min進行600V電壓電泳,2-3h后,在紫外燈下檢測帶型,主帶附近無雜帶說明純度高,條帶不單一就要根據實際雜帶亮度來判斷是否需要重新合成。PAGE電泳的整個過程耗時較長,且無法對主帶和雜帶進行定量分析,更多靠經驗判斷樣本合格與否。

有條件的單位可以采用毛細管電泳-質譜聯用(CE-MS)技術來質檢Oligo引物,不過質譜儀價位較高,用于引物質控會提高引物合成的成本,現有單位利用Qsep系列毛細管電泳儀進行Oligo純度質控,分辨率靈敏度會顯著高于PAGE電泳,儀器價位合適,又可同質譜儀一樣給出雜帶占比,量化的質控數據更具準確性和直觀性(見圖1,圖2所示):


圖1 毛細管電泳引物質控結果



圖2 毛細管電泳引物質控結果




 
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